: Главная arrow Клетка и ее структура arrow Вирусы бактерий (бактериофаги)  

Вирусы бактерий (бактериофаги)

Печать E-mail
 

 

Выделение и выявление. Выделить бактериофаг нетрудно. Нужно лишь взять материал из естественного местообитания соответствующего вида бактерий и вместе с бактериями залить питательной-Средой. Если та­кую накопительную культуру инкубировать в условиях, благоприятных для данных бактерий, то вскоре размножатся и содержавшиеся в пробе фаги. Вирус размножается всегда только в растущих клетках. Можно путем центрифугирования или фильтрации удалить оставшиеся бакте­рии, а затем в надосадочной жидкости-«лизате»-определить количе­ство фагов. Если засеять плотную питательную среду бактериальной взвесью, не содержащей фагов, то на ее поверхности образуется сплош­ной газон из бактерий. Если же теперь высеять суспензию, содержащую небольшое число фагов, в газоне появятся свободные от бактерий участки (стерильные пятна, или бляшки). В том месте, куда попал фаг и где он поразил бактерию, лизируется все большее число бакте­риальных клеток; через некоторое время инфицированная фагом область становится заметной уже невооруженным глазом как пятно, не содержащее бактерий, на фоне бактериального газона (рис. 4.1, В). Ис­пользуя подходящие методы, можно быстро размножать бактериофаги на бактериальных газонах на твердых средах или в суспензиях бакте­рий. Затем отделяют бактериальные клетки центрифугированием, уби­вают оставшиеся бактерии хлороформом и получают таким образом фаговый лизат, содержащий обычно от 1010 до 1013 фагов в 1 мл.

Морфология бактериофагов. Строение бактериофагов в основном изучали на примере фагов серии Т Escherichia coli. Колифаг Т2 состоит из полиэдрической головки длиной 100 нм и отростка, или «хвоста», примерно такой же длины. Поэтому говорят о «составных» вирусах (табл. 4.1). Головка состоит из капсомеров и содержит внутри ДНК. Количество белка и ДНК примерно одинаково. Отросток фага Т2 имеет сложное строение. В нем можно различить не менее трех частей: полый стержень, окружающий его сократимый чехол и находящуюся на дистальном конце стержня базальную пластинку с шипами и нитями (от последних зависит специфическая адсорбция на клетке-хозяине). На электронных микрофотографиях, полученных при негативном контра­стировании, можно видеть фаговые частицы в двух состояниях: у одних частиц головка очень резко выделяется на электроноплотном фоне и че­хол отростка растянут, у других головка мало отличается от фона по плотности и чехол находится в сокращенном состоянии. Это схематиче­ски изображено на рис. 4.7. Первое состояние (А) характерно для актив­ного фага, в головке которого заключена ДНК, второе (Б)-для фага, который инъецировал свою ДНК в бактериальную клетку.

Многие бактериофаги имеют более простое строение. В зависимости от формы зрелых фаговых частиц различают ряд типов, которые пред­ставлены на рис. 4.8 и 4.9. Большинство фагов содержит двухцепочеч-ную ДНК. В последние годы, однако, было обнаружено несколько фа-

 

Image

гов с одноцепочечной ДНК и несколько с одноцепочечной РНК. Содержащие РНК фаги fr (рис. 4.9, Д), R17, QP и другие обладают на­именьшими из известных геномов: в них 3500-4500 нуклеотидов.

 
« Пред.   След. »