В периодической культуре условия все время меняются; плотность популяции бактерий возрастает, а концентрация субстрата уменьшается. Во многих физиологических исследованиях представляется, однако, желательным, чтобы клетки могли долгое время находиться в фазе экспоненциального роста при постоянной концентрации субстрата в неизменных прочих условиях. В какой-то мере приблизиться к такому положению можно, многократно и достаточно часто перенося клетки в новую питательную среду. Той же цели было бы, очевидно, проще достичь, если в сосуд, содержащий популяцию растущих бактерий, непрерывно вводить новый питательный раствор и одновременно удалять из него соответствующее количество бактериальной суспензии. Именно 
такой метод положен в основу непрерывного культивирования в хемо-статах и турбидостатах. Рост в хемостате. Хемостат (рис. 6.9) состоит из сосуда-культиватора, в который из особого резервуара поступает с постоянной скоростью питательный раствор. Благодаря аэрации и механическому перемешиванию в культиваторе создаются оптимальные условия для снабжения клеток кислородом и для более быстрого и равномерного распределения питательных веществ, поступающих с новыми порциями раствора. По мере поступления в культиватор питательного раствора из него вытекает бактериальная суспензия. Обозначим объем сосуда через V (литров), а скорость поступления питательного раствора - скорость притока - через / (литров в час); тогда скорость разведения D будет равна//И Величина D, таким образом, отражает объем жидкости, сменяемый за 1 ч. Если бы при запуске хемо-стата бактерии, находящиеся в культиваторе (х [г/л]), не росли, то они вымывались бы из сосуда и скорость вымывания была бы равна D • х = dx = . Плотность бактериальной суспензии в сосуде снижалась бы dt в этом случае экспоненциально: х = х0-е~ . Бактерии в культиваторе тоже растут экспоненциально. Скорость dx прироста определяется выражением цх = --, т.е. экспоненциально уве- dt личивается и плотность бактериальной суспензии: Следовательно, скорость изменения плотности суспензии в сосуде dx/dt равна алгебраической сумме величин цх и - Dx: dx -- = их - Dx At Если скорость роста и и скорость разбавления D равны, то потеря в результате вымывания клеток и прирост биомассы уравновешивают друг друга, т. е. изменение равно нулю и плотность бактериальной суспензии х остается постоянной. Культура оказывается при этом в состоянии динамического равновесия. Экспоненциальное размножение клеток компенсируется другим экспоненциальным процессом, ведущим к уменьшению их числа. Рост культуры в хемостате контролируется концентрацией субстратов. На таком ограничении скорости роста концентрацией одного из необходимых субстратов (донора электронов, источника азота, серы или фосфора) основана стабильность системы. Если вследствие этого ограничения истинная скорость роста ц оказывается меньше цмакс (максимальной скорости, достижимой при насыщении субстратом), то скорость разбавления D можно менять в широких пределах без того, чтобы это привело к снижению плотности суспензии. Однако скорость разбавления не должна превышать цМакс- Зависимость константы роста ц от концентрации субстрата с$ описывается кривой насыщения (рис. 6.10). Вообще говоря, бактерии способны расти с максимальной скоростью уже при очень незначительных концентрациях субстрата (например, 10 мг глюкозы на 1 л). Только при еще меньших количествах субстрата величина а зависит от его концентрации. Ту концентрацию субстрата, при которой скорость роста а достигает половины максимального значения (ц = цМакс/2), обозначают Ks. Величина Ks наряду с величинами У и Цмакс-это один из важнейших параметров, характеризующих рост бактерий в хемостатах. На рис. 6.11 показано влияние скорости разбавления D на четыре показателя-плотность бактериальной суспензии, концентрацию субстрата, время удвоения и урожай клеток. При изменении скорости разбавления D от нуля почти до точки вымывания Dc плотность бактериальной суспензии меняется незначительно. В этой области бактерии 

реагируют на повышение D уменьшением времени удвоения. Однако с повышением скорости разбавления (когда увеличивается также скорость притока и уменьшается время удвоения) возрастает урожай клеток. Он достигает максимума при Dm, а при дальнейшем увеличении D резко снижается. Концентрация субстрата в культиваторе, а следовательно, и в вытекающей из него суспензии при низких скоростях разбавления в довольно широкой области близка к нулю. Лишь тогда, когда скорость разбавления приближается к величине, обеспечивающей максимальный рост, заметная часть субстрата начинает вымываться вместе с клетками; в конце концов концентрация субстрата на выходе становится равной его концентрации в поступающем питательном растворе. Стабильность динамического равновесия культуры в хемостате обусловлена тем, что ее рост лимитирует концентрация какого-то субстрата. Величина ц поддерживается на низком уровне. Хемостат представляет собой саморегулирующуюся систему, простую в работе; если скорость притока достаточно долго остается постоянной, то работа хемостата регулируется автоматически. Рост в турбидостате. От описанной выше непрерывной культуры в хемостате существенно отличается непрерывная культура в турбидостате. Как указывает само название, работа турбидостата основана на поддержании постоянной плотности бактериальной суспензии, или постоянной мутности. Датчик мутности регулирует через управляющую систему поступление питательного раствора. В сосуде для культивирования все питательные вещества содержатся в избытке, и скорость роста бактерий приближается к максимальной. Работа с турбидостатами технически сложнее, чем с хемостатами. Принципиальные различия. Между классической периодической культурой и непрерывной культурой в хемостате имеются принципиальные различия, которые в заключение следует еще раз подчеркнуть. Периодическую культуру можно рассматривать как замкнутую систему (в какой-то мере подобную многоклеточному организму), которая в своем развитии проходит четыре фазы-начальную, экспоненциальную, стационарную и фазу отмирания (юность, расцвет, старение и смерть). Условия существования культуры во всех этих фазах различны. Автоматическое регулирование в периодической культуре вряд ли возможно. Непрерывная культура представляет собой открытую систему, стремящуюся к установлению динамического равновесия. Фактор времени в ней в известной мере исключается. Для организмов создаются неизменные условия среды. Установка легко поддается автоматическому регулированию.
|